甘肃11选5app下载

站点地图 / 收藏本站 /  / 中文站
客户服务

肾脏标志物的新宠——中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)

浏览次数:158      日期:2019-05-22 10:08:12

据估计,目前全世界有8.5亿人因各种原因罹患肾脏疾病。慢性肾病(CKD)每年造成至少240万人死亡,目前是增长最快的第六大死因。


急性肾损伤(AKI)是CKD的重要驱动因素,全世界有1300多万人受其影响,其中85%发生在低收入和中等收入国家(LMICs)。此外,CKD和AKI是其他疾病和危险因素(包括心血管疾病、糖尿病、高血压、肥胖以及艾滋病毒、疟疾、结核病和肝炎等感染)发病率和死亡率增加的重要因素。儿童CKD和AKI不仅会导致儿童时期的大量发病率和死亡率,还会导致儿童期以外的医疗问题。


在过去40年内,急性肾功能损伤的预测并没有显著进步。目前的诊断方法,如血清肌酐或胱蛋白酶抑制剂C,只在肾功能恶化后才有所表达,而这可能在器官损伤1天以上才显现甚至仍不明显。因此以肌酐测定为基础的肾功能评价体系阻碍了AKI治疗的进展,需要用更加敏感、特异的方法测定AKI肾功能的下降。


近年来,在临床和实验室研究中发现了一些新的、更加敏感的AKI生物标志物,中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)就是其中重要代表之一,它不仅能在血清肌酐升高之前诊断AKI,而且能为AKI的病因诊断提供帮助。


与传统急性肾损伤标志物相比,NGAL具有很强的时效性,更高的灵敏性和特异性。

ClinJ Am Soc Nephrol. 2008 May; 3(3): 665–673. American Society of Nephrology


NGAL是小分子蛋白质,为脂质运载蛋白超家族成员,表达于肾小管上皮细胞、肝细胞、免疫细胞等。在肾缺血或肾毒性损害时NGAL显著上调,高表达于受损肾小管上皮细胞,特别是近端肾小管上皮细胞,促进上皮细胞再生,是一种缺血或肾毒性AKI的早期敏感并特异的生物标志物。


华美·科赛格从2015年8月推出NGAL多抗产品得到广泛认可后,经过精心研发,2016年3月又相继推出单抗产品,NGAL作为我司明星产品,一直广受青睐,目前已有不少试剂生产商采用我司的抗体转产。


NGAL临床应用项目优势


● 监测时间早:NGAL可以在肾脏发生损伤2小时内就显著升高。血清肌酐、尿素氮需要1-3天才有明显升高;胱抑素C、微球蛋白需要在20小时左右有显著升高。

● 易于判断:NGAL提示值是正常样本含量的数百倍,这样可避免检验系统误差造成临界值不好判断的情况。

● 特异性高:在单一研究中心的均质患者人群中,NGAL是特异性最好的预测AKI的指标。


--华美·科赛格NGAL诊断原料--


NGAL单克隆抗体

A. 化学发光平台

所有的单克隆抗体分别用作捕获抗体和标记抗体,组合成不同抗体对,用于双抗夹心法免疫检测。不同抗体对检测不同浓度的NGAL,进行四参数logistic拟合(图1),结果显示R²>0。99,配对组合理想。配对方式如下(捕获抗体-标记抗体):

MAb combination A: CSB-DA001DmN①-CSB-DA001AmN①

MAb combination B: CSB-DA001AmN①-CSB-DA001DmN①

MAb combination C: CSB-DA001AmN②-CSB-DA001DmN①

MAb combination D: CSB-DA001AmN③-CSB-DA001DmN①


甘肃11选5app下载 图1. 不同NGAL抗体组合测NGAL的校准曲线


为验证抗体对适用于临床检测,利用抗体对组合(A、B、C和D组合)对50例临床样本进行检测,并与一家高质量的诊断试剂测值进行对比,检测结果如图2,此结果表明四种组合检测数据与比对试剂相关性较好。


 

图2. 不同NGAL抗体组合应用于化学发光平台对临床样本的检测


B. 胶乳比浊平台

为验证抗体是否适用于胶乳增强免疫比浊法,将本公司的自产抗体制成胶乳比浊试剂和一家高质量的诊断试剂同时对血清样本进行检测,两者相关性高达0.97(图3),说明本公司自产单抗适用于胶乳增强免疫比浊试剂。


图3. 自产抗体和比对试剂对血样的检测


C. 免疫荧光层析平台

为验证抗体是否适用于免疫荧光层析,将本公司的自产抗体对40例临床样本进行检测,并与一家高质量的诊断试剂测值进行对比,检测结果如图4,检测数据与比对试剂相关性较好。


图4. NGAL抗体组合应用于免疫荧光层析平台对临床样本的检测


抗体热稳定性

将四种NGAL单克隆抗体置于-20℃、2-8℃和37℃,15天后测抗体的效价,从图5可以看出在2-8℃和37℃条件下抗体的效价与-20℃条件维持在一定水平,说明该抗体稳定性好。


 

图5. 四种NGAL单抗的稳定性测定


试剂热稳定性

甘肃11选5app下载 将NGAL单抗于4℃和37℃分别放置7天,再分别偶联至胶乳颗粒,然后在同一条件下检测不同浓度的NGAL校准品,结果如表1,37℃热处理的抗体相对于4℃存放,在检测性能方面变化很小,说明该抗体稳定性合格。


 

表1.不同温度处理后的单抗对NGAL检测的比较



NGAL多克隆抗体

利用外购高质量的比对试剂和本公司多抗制成胶乳试剂对50份随机样本进行检测,结果如下图6,两者相关系数高达0。98,表明本公司自产的多克隆抗体可以用于临床检测试剂。


图6.自产多抗配制试剂与外购比对试剂对临床样本测值的比较(胶乳增强免疫比浊法)


多抗稳定性

将多抗(未加保护剂)置于37℃加热处理7天后,然后偶联至胶乳颗粒,制备成胶乳试剂,检测不同浓度下的NGAL校准品,与未加热处理组比较(表2)。结果显示两者偏差不大,说明多抗比较稳定。


 

表2. 不同温度处理后的多抗对NGAL检测的比较


NGAL蛋白

科赛格同时还提供高质量的人NGAL蛋白,货号为CSB-DP001A 。该蛋白可用于免疫测试的校准品、免疫印迹(WB)等方面。



湖南快乐十分app下载 湖南快乐十分app下载 广东11选5app 蚂蚁彩票 甘肃11选5app 贵州11选5APP 河北11选5软件下载 金誉彩票注册 广西11选5APP下载 蚂蚁彩票